Objetivo

Generar una proteína quimérica inmunogénica que contenga el fragmento LC3 de Entamoeba histolytica fusionado a los dominios de administración retrógrada de la exotoxina A de Pseudomonas aeruginosa y KDEL3 para su uso como vacuna eficaz.

Resultados

Se diseñó un gen sintético optimizado por codones que codifica la construcción de fusión PEΔIII-LC3-KDEL3 para su expresión en Pichia pastoris . Este transgén se subclonó en el plásmido pPIC9 para su expresión inducible por metanol. Después de la transformación y selección de clones transformados positivos por PCR, se provocó la expresión de la proteína recombinante PEΔIII-LC3-KDEL3. Los ensayos de electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS, tinción de glicosilación de proteínas y transferencia Western demostraron una proteína de 67 kDa en el sobrenadante de cultivo del medio. La proteína recombinante se detectó con un anticuerpo policlonal anti-etiqueta 6X His y un anticuerpo policlonal específico de E. histolytica . Se indujo una respuesta de anticuerpos específicos en hámsteres después de la inmunización con esta proteína.

Conclusiones

Informamos por primera vez el diseño y la expresión de la proteína LC3 recombinante de E. histolytica fusionada a PEΔIII y KDEL3, con potencial aplicación como inmunógeno.